Chequeamos unas mutaciones de células haciendo una PCR y corriéndolas en un gel de agarosa, obtuvimos producto positivo con los primers usados para la mutada en algunas colonias y en otras mezcla de células, por esto se siembran en unas placas de petri para obtener mas colonias y poder corroborar su mutación. La mutación se hace por recombinación homóloga con un fragmento de ADN que contiene un marcador de selección URA3. Luego con primers especificos para las células wild type y para las células mutantes puedo ver si hay mutación.
Esterilizamos Ampicilina mediante la técnica de filtrado, en un flujo laminar y colocándola en 20 tubitos para poder guardarla y que no se deteriore al estarla descongelando y congelando todo el tiempo. La ampicilina viene en concentración 1000x (0,1 gr/ml).
Preparamos un medio de crecimiento, con:
Extractos de levadura 1%
Peptona 2%
Glucosa 2%
Agar 2% (para preparar placas).
La imagen es de las PCR y el plásmido de la semana pasada.
en el primer pocillo esta el marker y pocillo de por medio esta las PCR primero las positivas y luego la negativa (como no hay nada podemos afirmar que no hubo contaminación), y la ultima es la del plásmido.
la persona que vende el marker entrega también con éste un papel mostrando como va a correr y las bandas que indican tamaños según los pares de bases. Así podemos saber cuantos pares de bases tienen las PCR y el plásmido.
en el primer pocillo esta el marker y pocillo de por medio esta las PCR primero las positivas y luego la negativa (como no hay nada podemos afirmar que no hubo contaminación), y la ultima es la del plásmido.
la persona que vende el marker entrega también con éste un papel mostrando como va a correr y las bandas que indican tamaños según los pares de bases. Así podemos saber cuantos pares de bases tienen las PCR y el plásmido.
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