Segunda semana (22/05/08)

Sembramos bacterias E. Coli con un plásmido dentro, con el fin de multiplicar masivamente su número y así poder tener muchos plásmidos que luego utilizaremos para un clonado.

Para lograr esto tuvimos que realizar el siguiente procedimiento:

Preparamos el medio de crecimiento LB (NaCl 1%, Extractos de levadura 0,5 % Peptona 1%), para pesar sus componentes utilizamos una balanza analítica y luego, con una probeta, agregamos 100 ml de agua destilada. Rotulamos y mandamos a esterilizar (durante 30 minutos) junto con unos tres erlenmeyers. Colocamos el medio en los erlenmeyers y agregamos 10 μl de ampicilina 100mg/ml (1000x) con una micropipeta.

Luego sembramos la bacteria E. Coli (cepa DHSα) con los plásmidos (Yep-357). Pusimos los erlenmeyers en una incubadora a 37°C (shaker).

Usamos esta cepa de E.Coli ya que lo que queremos hacer es diferenciar las bacterias con el plásmido de las que no tienen y esto lo logramos con esta cepa, que es sensible a la ampicilina. El plásmido logra que la bacteria que lo haya integrado no muera y la que no lo tiene sí.
Usamos este plásmido porque se puede replicar en levaduras y en bacterias y además posee un gen reportero (β-Galactosa).

*La imagen es del plásmido Yep-357.