Este día transformamos células al introducimos plásmidos adentro. En éste caso las células a transformar eran ura-, osea que no crecen en un medio sin uracilo. Él plásmido que les introducimos les da el gen ura3 con la capacidad de generar su propio uracilo, por lo tanto los que lo incorporen van a sobrevivir en el medio uracilo-.
Para llevar a cabo todo esto:
-crecimos las cepas en placas de medio rico
-resuspendimos células en 1 ml de agua estéril y centrifugamos
-descartamos el sobrenadante y resuspendimos en el liquido remanente
-agregamos una solución que nos ayuda a que el plásmido entre en la célula (sumado al hitshock del siguiente paso)
-de la suspensión celular pasamos 20microl a otro eppendorf y le agregamos el ADN plasmidico
-los incubamos 30 minutos a 42°
-agregamos 1ml de agua esteril, centrifugamos para bajar las células
-y plaqueamos en el medio
Para llevar a cabo todo esto:
-crecimos las cepas en placas de medio rico
-resuspendimos células en 1 ml de agua estéril y centrifugamos
-descartamos el sobrenadante y resuspendimos en el liquido remanente
-agregamos una solución que nos ayuda a que el plásmido entre en la célula (sumado al hitshock del siguiente paso)
-de la suspensión celular pasamos 20microl a otro eppendorf y le agregamos el ADN plasmidico
-los incubamos 30 minutos a 42°
-agregamos 1ml de agua esteril, centrifugamos para bajar las células
-y plaqueamos en el medio
